补肾活血汤治疗股骨头坏死的分子靶点及机制网(3)

2.5 PPI 网络分析结果 结果显示，除IGHG1 蛋白与其他蛋白之间没有互作关系被排除，该网络包含128 个节点及1 428 条边，其中平均节点度值为22.31，见图4。以节点度值为评价参数，度值越大说明其在PPI 网络中越重要，可能在发挥生物学功能中起着重要的作用。度值排名前10 的靶点为白细胞介素6(IL-6)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子(EGF)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、表皮生长因子受体(EGFR)、骨桥蛋白(OPN)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARG)和叉头框转录因子2(Foxc2)，这些靶点可能是补肾活血汤发挥治疗股骨头坏死功效的关键靶点。

2.6 蛋白模块筛选分析结果 运用Cytoscape 3.7.2 软 件 的MCODE 插件 以Degree Cutoff=5，Node Score Cutoff=0.2，k-core=2，=100作为筛选参数，筛选出蛋白模块5 个，见图5。通过Metascape 数据库分析得知，红色区蛋白模块代表肽基苏氨酸磷酸化及修饰，进行间隙链接；蓝色蛋白模块代表腺苷酸环化酶调节G 蛋白偶联受体信号通路，同时磷脂酶C 激活G蛋白偶联受体信号通路，并对类固醇激素作出反应，调节脂代谢。

2.7 GO 富集分析及KEGG 通路分析结果 通过DAVID 数据库共筛选得到 GO条 目410 个(P＜ 0.05)，其 中 生 物 过 程(Biological processes，BP)条目289 个，分子功能(Molecular function，MF)条目76 个，细胞组成(Cell composition，CC)条目45 个，分别占70%，19%，11%，其中BP 主要涉及RNA 聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、调控细胞增殖、对药物的反应、凋亡过程的负调控、G 蛋白偶联受体信号通路和管生成等；分子功能主要涉及蛋白质结合、酶结合、蛋白质均二聚活性、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性和类固醇激素受体活性等方面；细胞组成方面主要涉及质膜、核、细胞外泌体、细胞外空间等方面。各类别前10 的条目见图6。KEGG 通路富集筛选得到110 条信号通路(P＜ 0.05)，其中排名前20 的通路绘制气泡图，见图7。补肾活血汤调控Wnt信号通路图见图8。

3 讨论 Discussion

股骨头坏死是骨科疑难病之一，其发病原因及病机尚不明确，且病程时间长，研究表明无论病因如何，该病最终会由于局部微循环障碍而导致血液循环受损，成骨细胞、骨髓组织病理性死亡[18]。中医学认为股骨头坏死属于“骨蚀”“骨痿”“骨痹”范畴，《素问·痿论》中记载“肾气热，则腰脊不举，骨枯而髓减，发为骨痿。”辨证治疗方面认为肾主骨，肾生骨髓，其充在骨，注重补肾气、益肝气、补脾活血化瘀，治疗股骨头坏死时多用补益肝肾、活血化瘀之药。补肾活血汤中补益药与活血药相配伍，既有补益肝肾，活血化瘀之效，又可免滋腻之弊。

根据网络药理学分析结果可见，补肾活血汤中关键活性成分占37%，其中槲皮素、淫羊藿醇、β-谷甾醇、山奈酚、木犀草素和补骨脂素能与20 个以上靶点相互作用，作用靶点最多的是槲皮素。研究证实，槲皮素可以促进骨髓间充质干细胞的增殖和骨向分化，具有增加成骨细胞分化的活性，还能抑制破骨细胞骨吸收和诱导破骨细胞凋亡[19]。此外，槲皮素还可以通过调节蛋白激酶、p38 及AKT 通路显著促进关节软骨细胞增殖及维持其表型[20]。在脂代谢方面，槲皮素通过降低线粒体膜电位下调PARP 和Bcl-2 的表达，进而激活Caspase-3，Bax 和Bak，诱导3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化与凋亡，同时槲皮素还是磷酸二酯酶抑制剂，能够降解脂肪细胞中的脂质，从而调节机体脂代谢[21-22]。淫羊藿醇与淫羊藿苷同属于黄酮类化合物，周爱珍等[23]通过实验研究发现淫羊藿醇提物能显著降低软骨细胞的凋亡率，同时还具有抑制软骨细胞外基质中蛋白多糖、胶原的降解，促进软骨细胞增殖等作用。研究显示，补骨脂素可能通过内皮依赖的一氧化氮途径以及调控内皮型一氧化氮合成酶蛋白的表达来发挥舒张骨内血管的作用[24]；并且通过实验证实，补骨脂素可显著促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，并于浓度呈正相关关系，低浓度的补骨脂素可以抑制成骨细胞凋亡，同时可以促进细胞增殖[25]。

图 1 ｜补肾活血汤中化合物分布Figure 1 ｜Distribution of compounds inBushen HuoxueDecoction图注：紫色代表没药，海蓝色代表杜仲，橙色代表枸杞子，绿色代表红花，黄色代表山茱萸，蓝色代表肉苁蓉，粉红色代表当归，紫红色代表补骨脂

图 2 ｜“药物-归经-活性成分-靶点”网络Figure 2 ｜“Drug-meridian-active ingredient-target” network图注：分析补肾活血汤的药物、归经、活性成分及调控靶点的关联。海蓝色菱形代表补肾活血汤中的药物，蓝色六边形代表归经，红色圆形代表活性成分，黄色箭头代表靶点，每条边表示节点之间的相互作用关系

文章来源：《现代中医药》 网址: http://www.xdzyyzz.cn/qikandaodu/2021/0301/409.html